Niraparib代價-MK-4827

Niraparib生物活性

體外

在全細胞試驗中，Niraparib（MK-4827）抑制PARP活性，EC50 = 4nM，EC90 = 45nM。 MK-4827用突變體BRCA-1和BRCA-2抑制癌細胞的增殖，CC50在10-100nM範圍內。 MK-4827顯示出優異的PARP1和2抑制，IC50分別為3.8和2.1nM，並且在全細胞試驗中。 為了驗證Niraparib（MK-4827）抑制這些細胞系中的PARP，用1μMMK-4827處理A549和H1299細胞不同時間並使用化學發光測定法測量PARP酶活性。 結果顯示，Niraparib（MK-4827）在處理後15分鐘內抑制PARP，在1小時時A549細胞抑制約85％，H1299細胞在1小時抑制約55％。

體內

Niraparib（MK-4827）具有良好的耐受性，並且在BRCA-1缺陷型癌症的異種移植模型中顯示出作為單一藥劑的功效。 Niraparib（MK-4827）在體內具有良好的耐受性，並且在BRCA-1缺陷型癌症的異種移植模型中顯示出作為單一藥劑的功效。 Niraparib（MK-4827）的特點是大鼠的藥代動力學可接受，血漿清除率為28（mL / min）/ kg，分布容積非常高（Vdss = 6.9 L / kg），終末半衰期長（t1 / 2 = 3.4 h），和優異的生物利用度，F = 65％。 Niraparib（MK-4827）在兩種情況下均可增強p53突變Calu-6腫瘤的放射反應，單日劑量50 mg / kg比25 mg / kg更有效，每日兩次

Niraparib實驗參考方法

細胞分析

使用HT Universal Chemiluminescent PARP Assay Kit在A549和H1299細胞中分析PARP的抑制。 簡言之，將細胞用DMSO或1μM鎳吡啶（MK-4827）處理15,30,60或120分鐘，胰蛋白酶消化，並轉移至預冷管中。 用冰冷的PBS洗滌細胞兩次，並重懸於冷的PARP提取緩沖液中。 將細胞懸浮液在冰上孵育30分鐘，周期性渦旋以破壞細胞膜。 離心懸浮液，將上清液轉移到冰上預冷的管中。 將96孔板的組蛋白包被孔用1X PARP緩沖液再水化，並在室溫下孵育30分鐘。 除去PARP緩沖液，並將通過Bio-Rad蛋白質測定法測定的20μg蛋白質加入每個孔中，然後加入稀釋的PARP-HSA酶和1X PARP緩沖液。 然後將條帶孔在室溫下孵育60分鐘，用含有0.1％Triton X-100的PBS洗滌兩次，然後用PBS洗滌。 將稀釋的Strep-HRP加入到條帶孔中並在室溫下孵育60分鐘。 如前所述再次洗滌孔。 將等體積的PeroxyGlow A和B組合併添加到孔中，並使用讀板器立即獲得化學發光讀數。

Animal Administration

小鼠

當腫瘤生長至直徑6.0mm時，將雌性裸鼠（Ncr Nu / Nu）隨機分配到由5至8只小鼠組成的治療組，此時開始用Niraparib（MK-4827）治療。 Niraparib（MK-4827）以25mg / kg的劑量每日兩次或50mg / kg每天一次給藥21天，或者在腫瘤直徑達到8mm的第9天停藥。 當腫瘤直徑達到8.0mm（7.7-8.2mm）時，給予分次局部腫瘤照射（XRT）。 使用由兩個平行相對的137Cs源組成的小動物輻照器，每天一次連續14天或每天兩次將輻射（每個部分2Gy）遞送至小鼠的腫瘤腿部連續14天或連續7天，劑量率為 5戈瑞/分鐘。 在照射期間，將未麻醉的小鼠機械固定在夾具中，使得腫瘤在3.0cm直徑的輻射場內居中，並且動物的身體避免輻射暴露。 在給予Niraparib和放射的那天，在當天的第一次輻射劑量之前1小時施用藥物。

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